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    BJ5183-AD-1電轉感受態細胞

    BJ5183-AD-1電轉感受態細胞

    簡要描述:BJ5183-AD-1電轉感受態細胞
    BJ5183-AD-1是攜帶了腺病毒質粒pAdeasy-1的BJ5183菌株。BJ5183菌株是一種具有較高重組活力的大腸桿菌菌株,是目前腺病毒系統常用的感受態細胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC雙重突變,賦予BJ5183細胞較強的重組能力,有利于轉入的目的基因與腺病毒骨架質粒的重組。

    更新時間:2022-01-20

    廠商性質:生產廠家

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    詳情介紹
    品牌其他品牌貨號BFNC86044
    規格5x50ul/20x50ul供貨周期現貨
    主要用途僅用于科研應用領域醫療衛生,生物產業

    BJ5183-AD-1電轉感受態細胞



    產品規格CAT#: BFNC86044-01(5×50ul)/BFNC86044-02(20×50ul)

    BJ5183-AD-1 Electroporation-Competent Cell             50μl/支

    pCAMBIA2301 (control vector, 10ng/μl):                            10μl

    保存條件(保質期):                                                -80℃(6個月)


    基因型

    endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR) [pAdEasy-1 (AmpR)]



    BJ5183-AD-1電轉感受態細胞



    產品說明

    BJ5183-AD-1是攜帶了腺病毒質粒pAdeasy-1的BJ5183菌株。BJ5183菌株是一種具有較高重組活力的大腸桿菌菌株,是目前腺病毒系統常用的感受態細胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC雙重突變,賦予BJ5183細胞較強的重組能力,有利于轉入的目的基因與腺病毒骨架質粒的重組。endA1(缺失核酸內切酶)的突變有利于重組DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。BJ5183-AD-1菌株細胞中已經提前轉入了腺病毒質粒pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)],賦予該菌株氨芐抗性,在病毒質粒構建時,只需轉入線性化的目的質粒即可,簡化了實驗步驟,提高了病毒質粒重組概率。StrR 賦予BJ5183-AD-1菌株鏈霉素抗性。

    青旗生物生產的BJ5183-AD-1電擊感受態細胞適用于普通質粒和大質粒的構建,經特殊工藝制作,pCAMBIA2301質粒(size:1163bp)檢測轉化效率>1×106 cfu/μg DNA。



    操作方法

    1. 0.1 cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發,待乙醇揮發干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。

    2. 取-80℃保存的BJ5183-AD-1電擊感受態細胞插入冰中5分鐘,待其融化,加入目的DNA (質粒或連接產物)并用手bo打EP管底輕輕混勻,避免產生氣泡,立即插入冰中。

    A. 測定轉化效率使用1 μl 10 pg/μl的對照質粒pCAMBIA2301;

    B. 對于連接產物,請用乙醇沉淀DNA后加入適量TE緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重懸,DNA濃度不超過100 ng/μl,體積不超過5 μl/50 μl感受態。

    3. 用200 μl槍頭(用刀切除0.5cm槍尖)將感受態-DNA混合物快速移到電擊杯中,避免產生氣泡,蓋上杯蓋。

    4. 啟動電轉儀,設置參數:C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV (此為BioRad 電轉儀推薦參數,也可按所用電轉儀推薦的參數操作),將電擊杯快速放入電轉槽中,電擊完成快速插入冰中。

    5. 2分鐘后從冰中取出電擊杯,放室溫,加入700 μl不含抗生素的無菌S.O.C. 培養基(室溫),用1ml槍吹吸電擊杯底部數次混勻后,轉移到50 ml離心管(BD Falcon 50 ml錐形離心管等),向離心管中補加S.O.C. 培養基至10 ml。37℃,225 rpm復蘇60分鐘。

    6. 5000 rpm離心一分鐘收菌,重懸后取100-200 μl涂布到含相應抗生素的S.O.C平板上(因菌量較大,若全部涂板請選用直徑15cm培養皿2-5個)。將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。


    S.O.C 培養基配方


    2% Tryptone

    0.5% Yeast Extract

    10 mM NaCl

    2.5 mM KCl

    10 mM MgCl2

    10 mM MgSO4

    20 mM glucose

    PH-7.0

    S.O.C. Medium is suitable for use in the final step of cell transformation to obtain


    maximal transformation efficiency of E. coli (Hanahan, 1983).


    注意事項


    1. 加入DNA時體積不應大于感受態體積的1/10。

    2. 電轉感受態細胞加入電擊杯應避免產生氣泡,氣泡會增加弧光放電風險。

    3. 當DNA不純或存在鹽,乙醇,蛋白及緩沖液等污染時,轉化效率急劇下降。

    4. 電擊杯里的離子可增加溶液的電導,增大在含有細胞和DNA的溶液中產生電流和弧光放電的風險。

    5. 若轉化大質粒或想獲得較高轉化效率,推薦使用高純質粒提取試劑盒提取質粒。質粒增大一倍,轉化效率下降一個數量級。

    6. 對于連接產物轉化,盡量轉化前乙醇沉淀DNA后用適量TE緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重懸產物,保證DNA濃度不超過100 ng/μl。過高濃度連接產物或過大體積連接產物會降低轉化效率,增加弧光放電的風險。

    7. 混入質粒時應輕柔操作,吸取感受態細胞時避免用力過猛,以免剪切力過大損傷細胞膜,降低轉化效率。轉化高濃度的質粒或連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。

    8. 電轉感受態細胞盡量保存在-80℃以下,高于-80℃超期儲存會導致轉化效率會下降。




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