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    C43(DE3) pLysS感受態(tài)細(xì)胞

    C43(DE3) pLysS感受態(tài)細(xì)胞

    簡(jiǎn)要描述:C43(DE3) pLysS感受態(tài)細(xì)胞
    OverExpress C43(DE3)、OverExpress C41(DE3)兩個(gè)菌株均起源于BL21(DE3),其優(yōu)點(diǎn)是可以高效表達(dá)毒性蛋白或疏水性蛋白。

    更新時(shí)間:2022-01-20

    廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

    瀏覽次數(shù):1024

    詳情介紹
    品牌其他品牌貨號(hào)BFNC86082
    規(guī)格10x100ul/50x100ul供貨周期現(xiàn)貨
    主要用途僅用于科研應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

    C43(DE3) pLysS感受態(tài)細(xì)胞



    產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86082-01(10×100ul)/BFNC86082-02(50×100ul)


    C43(DE3) pLysS:                                       100μl/支

    pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

    保存條件(保質(zhì)期):                             -80℃(6個(gè)月)



    基因型

    FompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)pLysS CamR





    產(chǎn)品說明

    OverExpress C43(DE3)、OverExpress C41(DE3)兩個(gè)菌株均起源于BL21(DE3),其優(yōu)點(diǎn)是可以高效表達(dá)毒性蛋白或疏水性蛋白。OverExpress C41(DE3)跟BL21(DE3)的區(qū)別在于其基因組含有至少一個(gè)未知突變,這個(gè)未知突變使其獲得了高效表達(dá)毒性蛋白的能力,此突變位點(diǎn)參與大腸桿菌表達(dá)毒性蛋白時(shí)的細(xì)胞死亡途徑;OverExpress C43(DE3)來源于OverExpress C41(DE3),是通過篩選OverExpress C41(DE3)對(duì)另一個(gè)不同毒性蛋白的抗性菌株獲得。C43(DE3)菌株具有比C41(DE3)更強(qiáng)的表達(dá)毒性蛋白和疏水性蛋白的能力。將具有氯霉素抗性的pLysS質(zhì)粒導(dǎo)入C43(DE3)細(xì)胞中即是C43(DE3) pLysS,pLysS表達(dá)T7溶菌酶,T7溶菌酶可以與T7 RNA聚合酶結(jié)合抑制其轉(zhuǎn)錄活性,進(jìn)而降低目的基因的背景表達(dá)水平,但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá),非常適合毒性蛋白的原核表達(dá)。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū) (DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶),可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。

    青旗生物生產(chǎn)的C43(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×108 cfu/μg DNA。


    操作方法

    1. C43(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的質(zhì)粒,并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

    2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

    3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的 LB無菌培養(yǎng)液,37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

    4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含34 µg/ml氯霉素及所選質(zhì)粒篩選抗生素的LB培養(yǎng)基上。

    5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。


    C43(DE3) pLysS感受態(tài)細(xì)胞



    IPTG配制:

    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

    氯霉素配制

             Chloramphenicol  34 mg/ml in ethanol. Store at -20℃. Use at 34 µg/ml.




    注意事項(xiàng)

    1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

    2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

    3. 誘導(dǎo)時(shí),IPTG濃度可選(0.1-2 mM均可)。

    4. 為獲得需要量的蛋白,誘導(dǎo)時(shí)間,溫度,IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。

    5. C43(DE3)pLysS 菌株攜帶 pLysS質(zhì)粒,除復(fù)蘇培養(yǎng)基為無抗生素外,其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應(yīng)含有34 µg/ml氯霉素,以防質(zhì)粒丟失。




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