人外周血單核細胞PBMC

驗收細胞注意事項 

1、收到人外周血單核細胞PBMC細胞，請查看瓶子是否有破裂，培養基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快聯系。 

2、收到人外周血單核細胞PBMC細胞 ，如包裝完好，請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題，細胞培養瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現細胞懸浮的情況，出現此狀態時，請不要打開細胞培養瓶，應立即將培養瓶置于細胞培養箱里靜止 3-5 小時左右，讓細胞先穩定下，再于顯微鏡下觀察，此時多數細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理。 

3、收到人外周血單核細胞PBMC細胞后，請鏡下觀察細胞，用恰當方式處理細胞。若懸浮的細胞較多，請離心收集細胞，接種到一個新的培養瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養基，使用進口胎牛血清。剛接到細胞，若細胞不多時 血清濃度可以加到 15％去培養。若細胞迏到 80%左右 ，血清濃度還是在 10％。 

4、收到人外周血單核細胞PBMC細胞時如無異常情況 ，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養瓶中培養基吸出，留下 5-10ML 培養基繼續培養：超過 80%匯合度時，請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞，吸出培養液，1000 轉/分鐘離心 3 分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。 

5、將培養瓶置于 37℃培養箱中培養，蓋子微微擰松。吸出的培養基可以保存在滅菌過的瓶子里，存放于 4℃冰箱，以備不時之需。 

6、24 小時后，細胞形態已恢復并貼滿瓶壁，即可傳代。（貼壁細胞）將培養瓶里的培養基倒去，加 3-5ml（以能覆蓋細胞生長面為準）PBS 或 Hanks’液洗滌后棄去。加 0.5-1ml 0.25%含 EDTA 的胰酶消化，消化時間以具體細胞為準，一般 1-3 分鐘，不超過 5 分鐘。可以放入37℃培養箱消化。輕輕晃動瓶壁，見細胞脫落下來，加入 3-5ml 培養基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落，然后將溶液吸入離心管內離心，1000rpm/5min。棄上清，視細胞數量決定分瓶數，一般一傳二，如細胞量多可一傳三，有些細胞不易傳得過稀，有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶，以具體細胞和經驗為準。（懸浮細胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。 

7、貼壁細胞 ，懸浮細胞。嚴格無菌操作。換液時，換新的細胞培養瓶和換新鮮的培養液，37℃，5%CO2 培養。

特別提醒： 原瓶中培養基不宜繼續使用，請更換新鮮培養基培養。