克隆感受態細胞是如何被制作的？

　　克隆感受態細胞的理化方法誘導細胞，吸收周圍環境中的DNA分子，使其處于最適攝取和容納外來DNA的生理狀態。

 

　　它主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大，直觀的說，使得細胞膜表面出現一些孔洞，便于外源基因或載體進入感受態細胞。由于細胞膜的流動性，這種孔洞會被細胞自身所修復。

 

　　克隆感受態細胞的制作方法：

　　CaCl2法：

　　1、將快速生長的大腸桿菌置于經低溫（0℃）預處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹，同時Ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構，促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區域，誘導細胞成為克隆感受態細胞；

　　細胞壁通透性發生變化，極易與外源DNA相粘附并在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基－磷酸鈣復合物。

　　聯合其它的二價金屬離子（如Mn、Co）、DMSO或還原劑等物質處理細菌，則可使轉化率提高100～1000倍。

　　2、此時，將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激（90s），細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動，并隨機出現許多間隙，外源DNA就可能被細胞吸收。進入細胞的外源DNA分子通過復制、表達，實現遺傳信息的轉移，使受體細胞出現新的遺傳性狀。

　　3、將轉化后的細胞在選擇性培養基上培養，篩選出帶有外源DNA分子的陽性克隆。

 

　　電轉法：

　　電擊法不需要預先誘導細菌的感受態，依靠短暫的電擊，促使DNA進入細菌，轉化率最高能達到109~1010轉化子/ug閉環DNA。因操作簡便，愈來愈為人們所接受。