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    XL10-Gold化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

    XL10-Gold化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

    簡(jiǎn)要描述:XL10-Gold化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
    XL10-Gold是目前轉(zhuǎn)化效率*的感受態(tài)細(xì)胞,由Stratagene開(kāi)發(fā)的特異性用于大質(zhì)粒或珍貴連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化或構(gòu)建文庫(kù)的超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞。XL10-Gold菌株為Hte(high transformation efficiency)基因型,Hte是Stratagene開(kāi)發(fā)的特異性提高感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率及大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化能力的宿主菌基因型,已成功應(yīng)用于40kd質(zhì)粒構(gòu)建。

    更新時(shí)間:2022-01-18

    廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

    瀏覽次數(shù):665

    詳情介紹
    品牌其他品牌貨號(hào)BFNC86014
    規(guī)格10x100ul/50x100ul供貨周期現(xiàn)貨
    主要用途僅用于科研應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

    XL10-Gold化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞



    產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86014-01(10×100ul)/BFNC86014-02(50×100ul)

    XL10-Gold:                                              100μl/支

    pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

    保存條件(保質(zhì)期):                            -80℃(6個(gè)月)


    基因型

    TetR Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F? proAB lacIqZΔM15 Tn10 (TetR) Amy CamR]





    產(chǎn)品說(shuō)明

    XL10-Gold是目前轉(zhuǎn)化效率高的感受態(tài)細(xì)胞,由Stratagene開(kāi)發(fā)的特異性用于大質(zhì)粒或珍貴連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化或構(gòu)建文庫(kù)的超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞。XL10-Gold菌株為Hte(high transformation efficiency)基因型,Hte是Stratagene開(kāi)發(fā)的特異性提高感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率及大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化能力的宿主菌基因型,已成功應(yīng)用于40kd質(zhì)粒的構(gòu)建。[Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]賦予XL10-Gold缺失幾乎所有已知的限制酶切系統(tǒng);同時(shí)缺失核酸內(nèi)切酶(endA),提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量;重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA的穩(wěn)定性;TetRCamR賦予菌株四環(huán)素和氯霉素抗性;lacIqZΔM15的存在使XL10-Gold可用于藍(lán)、白斑篩選。

    青旗生物生產(chǎn)的XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>2×109 cfu/μg DNA。


    常規(guī)操作方法

    1. XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA (質(zhì)粒或連接產(chǎn)物) 并用手bo打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

    2. 42℃水浴熱激35(非常重要——Efficiency decreases sharply when cells are heat-pulsed for<30 seconds="" or="" for="">40 seconds.,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

    3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基(2YTLB),混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。

    4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YTLB培養(yǎng)基上。

    5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。


    XL10-Gold化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞


    注意事項(xiàng)

    1. 感受態(tài)細(xì)胞適宜在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

    2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

    3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

    4. XL10-Gold菌株對(duì) <40 µg/ml氯霉素有抗性,但對(duì)100 µg/ml氯霉素敏感。

    5.XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞采用常規(guī)轉(zhuǎn)化方法,轉(zhuǎn)化效率可達(dá)2×109 cfu/μg DNA;如果有更高要求,可嘗試Stratagene公司推薦的標(biāo)準(zhǔn)protocol




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