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    BL21 Star(DE3)pLysS?感受態細胞

    BL21 Star(DE3)pLysS?感受態細胞

    簡要描述:BL21 Star(DE3)pLysS?感受態細胞
    異源蛋白的基礎表達水平提高,可同時用于pET系列,pGEX,pMAL等質粒的蛋白表達

    更新時間:2022-01-20

    廠商性質:生產廠家

    瀏覽次數:843

    詳情介紹
    品牌其他品牌貨號BFNC86071
    規格10x100ul/50x100ul供貨周期現貨
    主要用途僅用于科研應用領域醫療衛生,生物產業

    BL21 Star(DE3)pLysS感受態細胞



    產品規格CAT#: BFNC86071-01(10×100ul)/BFNC86071-02(50×100ul)


    BL21 Star(DE3)pLysS:                               100μl/支

    pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

    保存條件(保質期):                             -80℃(6個月)




    基因型

    F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm rne131 (DE3)pLysS (CamR)


    產品說明

    BL21 Star(DE3)pLysS菌株來源于BL21(DE3),含有rne131突變(RNaseE基因),RNaseE基因的突變降低了內源RNase的積累,增強菌株細胞內mRNA的穩定性,從而提高異源蛋白的表達水平。主要適用于T7啟動子表達載體(如pET系列)的高水平蛋白表達,同時含有大腸桿菌RNA聚合酶,也可用于非T7啟動子表達載體(pGEX,pMAL等)的蛋白表達。由于BL21 Star(DE3)菌株的異源基因基礎表達水平較高,所以不適合毒性蛋白的表達。BL21 Star(DE3)pLysS菌株攜帶pLysS質粒,具有氯霉素抗性。pLysS含有表達T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶可以作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌,還可與T7 RNA聚合酶結合抑制其轉錄活性,進而降低目的基因的背景表達水平,但不干擾IPTG誘導的表達。pLysS質粒含有p15A復制起始子,可以和含有 pUC或pBR322等復制起始子的質粒兼容。

    青旗生物生產的BL21 Star(DE3)pLysS感受態細胞由特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率達107 cfu/μg DNA。


    操作方法

    1. BL21 Star(DE3)pLysS 感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的質粒并用手bo打EP管底輕輕混勻,冰中靜置25分鐘。

    2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

    3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

    4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

    5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。



    BL21 Star(DE3)pLysS感受態細胞



    IPTG

    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

    dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.


    注意事項

    1. 感受態細胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

    2. 混入質粒時應輕柔操作。

    3. 轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。

    4. 誘導時,IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

    5. 為獲得需要量的蛋白,誘導時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優化。

    6. BL21 Star(DE3)pLysS 菌株攜帶 pLysS質粒,除復蘇培養基為無抗生素外,其余所用培養基、培養液均應含有34 µg/ml氯霉素,以防質粒丟失。




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