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    BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL感受態(tài)細(xì)胞

    BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL感受態(tài)細(xì)胞

    簡(jiǎn)要描述:BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL感受態(tài)細(xì)胞
    提高外源基因,尤其是富含AT-或 GC-的真核基因在原核系統(tǒng)中的表達(dá)水平。

    更新時(shí)間:2022-01-20

    廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

    瀏覽次數(shù):1068

    詳情介紹
    品牌其他品牌貨號(hào)BFNC86072
    規(guī)格10x100ul/50x100ul供貨周期現(xiàn)貨
    主要用途僅用于科研應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

    BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL感受態(tài)細(xì)胞



    產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86072-01(10×100ul)/BFNC86072-02(50×100ul)


    BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL:                  100μl/支

    pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

    保存條件(保質(zhì)期):                             -80℃(6個(gè)月)




    基因型

    FompT hsdS(rBmB) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [argU proL CamR] [argU ileY leuW Strep/SpecR]





    產(chǎn)品說明

    BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株來源于Stratagene公司的BL21-Gold菌株,缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶,從而減少對(duì)重組蛋白的降解,補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的4種稀有密碼子 (AGA, AUA, CCC, CUA)對(duì)應(yīng)的tRNA (argU, ileY, proL, leuW),提高外源基因,尤其是富含AT-或 GC-的真核基因在原核系統(tǒng)中的表達(dá)水平。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū) (DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶),可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,可用于pET系列、pGEX、pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá),同時(shí)具有四環(huán)素,氯霉素,鏈霉素,壯觀霉素抗性。

    青旗生物生產(chǎn)的BL21- CodonPlus(DE3)-RIPL 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)108 cfu/µg DNA。


    操作方法

    1. BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

    2. 42水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

    3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YTLB),混勻后37200rpm復(fù)蘇60分鐘。

    4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT LB培養(yǎng)基上。

    5. 將平板倒置放于37培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。


    BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL感受態(tài)細(xì)胞


    IPTG

    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.  


    注意事項(xiàng)

    1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

    2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

    3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

    4. 誘導(dǎo)時(shí),IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

    5. 為獲得需要量的蛋白,誘導(dǎo)時(shí)間,溫度,IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。




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