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    Rosetta(DE3)感受態細胞

    Rosetta(DE3)感受態細胞

    簡要描述:Rosetta(DE3)感受態細胞
    Rosetta(DE3)菌株具有氯霉素抗性,補充大腸桿菌缺乏的6 種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)對應的tRNA,提高外源基因,尤其是真核基因在原核系統中的表達水平。

    更新時間:2022-01-20

    廠商性質:生產廠家

    瀏覽次數:850

    詳情介紹
    品牌其他品牌貨號BFNC86073
    規格10x100ul/50x100ul供貨周期現貨
    主要用途僅用于科研應用領域醫療衛生,生物產業

    Rosetta(DE3)感受態細胞



    產品規格CAT#: BFNC86073-01(10×100ul)/BFNC86073-02(50×100ul)


    Rosetta(DE3):                                           100μl/支

    pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

    保存條件(保質期):                             -80℃(6個月)



    基因型

    F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm(DE3) pRARE(argU, argW, ilex, glyT, leuW, proL) (CamR)





    產品說明

    Rosetta(DE3)菌株具有氯霉素抗性,補充大腸桿菌缺乏的6 種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)對應的tRNA,提高外源基因,尤其是真核基因在原核系統中的表達水平,該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區 (DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶),同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等質粒的蛋白表達。

    青旗生物生產的Rosetta(DE3)感受態細胞由特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率高達108 cfu/μg DNA。


    操作方法

    1. Rosetta(DE3)感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質粒或連接產物)并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

    2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

    3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200rpm復蘇60分鐘。

    4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT 或LB培養基上。

    5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。



    Rosetta(DE3)感受態細胞


    IPTG

    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

    dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

    氯霉素

    Chloramphenicol  34 mg/ml in ethanol. Store at -20℃. Use at 34 µg/ml.


    注意事項

    1. 感受態細胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

    2. 混入質粒時應輕柔操作。

    3. 轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。

    4. 誘導時,IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

    5. 為獲得需要量的蛋白,誘導時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優化。




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