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    Rosetta-gami B(DE3)感受態(tài)細胞

    Rosetta-gami B(DE3)感受態(tài)細胞

    簡要描述:Rosetta-gami B(DE3)感受態(tài)細胞
    Rosetta-gami B(DE3) 菌株聚合了BL21,Tuner,Origami和 Rosetta四種菌株的優(yōu)點。

    更新時間:2022-01-20

    廠商性質:生產廠家

    瀏覽次數(shù):841

    詳情介紹
    品牌其他品牌貨號BFNC86075
    規(guī)格10x100ul/50x100ul供貨周期現(xiàn)貨
    主要用途僅用于科研應用領域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產業(yè)

    Rosetta-gami B(DE3)感受態(tài)細胞



    產品規(guī)格CAT#: BFNC86075-01(10×100ul)/BFNC86075-02(50×100ul)


    Rosetta-gami B(DE3):                             100μl/支

    pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

    保存條件(保質期):                             -80℃(6個月)


    基因型

    F- ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pRARE (CamR, KanR, TetR)



    產品說明

    Rosetta-gami B(DE3) 菌株聚合了BL21,Tuner,Origami和 Rosetta四種菌株的優(yōu)點:


    lacY1基因 (半乳糖苷透性酶基因)突變賦予其Tuner菌株的優(yōu)點——IPTG以均一速度進入體系中大腸桿菌的每個細胞,產生更加嚴格、均一的濃度依賴。

    pRARE賦予其Rosetta菌株的優(yōu)點——補充大腸桿菌缺乏的6 種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)對應的tRNA,提高外源基因的表達水平。

    gor522::Tn10 trxB賦予其Origami菌株的優(yōu)點——突變的硫氧還蛋白還原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽還原酶(glutathione reductase) (gor)基因,它們是還原途徑的兩個關鍵酶,其突變有利于高效形成正確折疊的含有二硫鍵的蛋白,增強蛋白的可溶性。

    該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū) (DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶)適合T7啟動子誘導的蛋白表達。

    Rosetta-gamiB(DE3)菌株具有卡那霉素,氯霉素,四環(huán)素抗性,由特殊工藝制作,經pUC19質粒檢測轉化效率高達108 cfu/μg DNA。



    操作方法

    1. Rosetta-gamiB(DE3)菌株感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

    2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

    3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200rpm復蘇60分鐘。

    4. 5000rpm離心一分鐘收菌,,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含34 µg/ml氯霉素及所選質粒篩選抗生素的2YT 或LB培養(yǎng)基上。

    5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。



    Rosetta-gami B(DE3)感受態(tài)細胞



    IPTG

    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

    dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.


    注意事項

    1. 感受態(tài)細胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

    2. 混入質粒時應輕柔操作。

    3. 轉化高濃度的質??上鄳獪p少終用于涂板的菌量。

    4. 誘導時,IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

    5. 為獲得需要量的蛋白,誘導時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。

    6. 具有卡那霉素抗性,不能用于具有卡那霉素抗性質粒的表達。




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