OrigamiB（DE3）pLysS感受態細胞

OrigamiB(DE3)pLysS感受態細胞

產品規格CAT#: BFNC86079-01(10×100ul)/BFNC86079-02(50×100ul)

OrigamiB(DE3)pLysS：                               100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質期)：                             -80℃（6個月）

基因型

F^-ompT hsdS_B(r_B^-m_B^-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (Kan^R,Tet^R) pLysS Cam^R

產品說明

Origami B (DE3) pLysS菌株攜帶pLysS質粒，具有氯霉素抗性。pLysS可表達T7溶菌酶（T7溶菌酶可以作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，還可與T7 RNA聚合酶結合抑制其轉錄活性，進而降低目的基因的背景表達水平，但不干擾IPTG誘導的表達），適合表達毒性蛋白和非毒性蛋白。Origami B (DE3) pLysS菌株表達突變的硫氧還蛋白還原酶 (thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽還原酶 (glutathione reductase) (gor)，這兩個酶是還原途徑的關鍵酶，突變后有利于形成正確折疊的含有二硫鍵的蛋白，增強蛋白的可溶性。 此外，該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區 (DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶)，可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質粒的蛋白表達，具有氯霉素、卡那霉素和四環素抗性，不能用于具有氯霉素，卡那霉素抗性質粒的表達。

青旗生物生產的Origami B (DE3) pLysS感受態細胞由特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率達10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. Origami B (DE3) pLysS感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質粒，并用手bo打EP 管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

OrigamiB(DE3)pLysS感受態細胞

IPTG配制：

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

氯霉素配制

Chloramphenicol  34 mg/ml in ethanol. Store at -20℃. Use at 34 µg/ml.

注意事項

1. 感受態細胞盡量在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質粒時應輕柔操作，轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。

3. 誘導時，IPTG濃度可選（0.1-2 mM均可）。

4. 為獲得需要量的蛋白，誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優化。

5. 具有氯霉素，卡那霉素和四環素抗性，不能用于具有氯霉素，卡那霉素和四環素抗性質粒的表達。