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    EHA105感受態細胞

    EHA105感受態細胞

    簡要描述:EHA105感受態細胞
    EHA105菌株由EHA101菌株改造而來,為C58型背景,核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif。EHA105菌株適用于水稻、煙草等植物的轉基因操作。

    更新時間:2022-01-21

    廠商性質:生產廠家

    瀏覽次數:948

    詳情介紹
    品牌其他品牌貨號BFNC86098
    規格10x100ul/50x100ul/100x100ul供貨周期現貨
    主要用途僅用于科研應用領域醫療衛生,生物產業

    EHA105感受態細胞


    產品規格CAT#: BFNC86098-01(10×100ul)/BFNC86098-02(50×100ul) /BFNC86098-03(100×100ul)

    EHA105:                                                                  100μl/支
    pCAMBIA2301(control vector,10ng/μl )                    10μl
    保存條件(保質期):                                         -80℃(12個月)




    基因型

    C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine




    產品說明
    EHA105菌株由EHA101菌株改造而來,為C58型背景,核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif,為了便于轉化操作,此菌株攜帶一無自身轉運功能的琥珀堿型Ti質粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA),此質粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞,但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。EHA105菌株適用于水稻、煙草等植物的轉基因操作。

    青旗生物生產的EHA105化學轉化感受態細胞經特殊工藝制作,pCAMBIA2301質粒檢測轉化效率>104 cfu/μg DNA。


    操作方法

    1. -80℃保存的農桿菌感受態于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態時插入 冰中。

    2.每100 μl感受態加入0.01-1 μg質粒DNA(轉化效率較高,*使用前盡量做預實驗確定所加質粒的量),用手bo打管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。

    3. 加入700 μl無抗生素的LBYEB液體培養基,于28℃振蕩培養2~3小時。

    4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LBYEB平板上,倒置放于28℃培養箱培養2-3

    (當平板只含有50 μg/ml kan 時,28培養48 h即可;平板中同時加入50 μg/ml kan20 μg/ml rif 時,需28培養60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28培養72-90 h)。


    EHA105感受態細胞


    備注

    1、農桿菌相關抗生素配方:

    抗生素

    配方

    原液

    工作液

    羧芐青霉素(carb

    雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

    50 mg/ml

    50 μg/ml

    硫酸卡那霉素(kan

    雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

    50 mg/ml

    50 μg/ml

    鏈霉素(strep

    雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

    10 mg/ml

    50 μg/ml

    利福平(rif

    DMSO溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

    10 mg/ml

    20 μg/ml

    慶大霉素(gent

    雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

    20 mg/ml

    40 μg/ml


    2、常用農桿菌抗性:(R:抗;S:敏感。)

    農桿菌菌株

    羧芐青霉素(carb)

    鏈霉素(strep)

    利福平(rif)

    慶大霉素(gent)

    硫酸卡那霉素(kan)

    AGL-1

    R

    S

    R

    S

    S

    EHA101

    S

    S

    R

    S

    R

    EHA105

    S

    S

    R

    S

    S

    LBA4404

    S

    R

    R

    S

    S

    GV3101

    S

    S

    R

    R

    S


    3LBYEB配方:

    component

    LB(液體)/L

    LB(固體)/L

    component

    YEB(液體)/L

    YEB(固體)/L

    Tryptone

    10 g

    10 g

    Tryptone

    5 g

    5 g

    Yeast extract

    5 g

    5 g

    Yeast extract

    1 g

    1 g

    NaCl

    10 g

    10 g

    牛肉浸膏

    5 g

    5 g

    NaOH

    調PH7.0

    調PH7.0

    蔗糖

    5 g

    5 g

    Agar

    15 g

    MgSO4*7H2O

    0.49 g

    0.49 g




    NaOH

    調PH7.0

    調PH7.0




    Agar

    15 g


    注意事項


    1. 加入質粒時體積不應大于感受態體積的1/10;質粒不純或存在乙醇等有機物污染,轉化效率急劇下降;質粒增大一倍,轉化效率下降一個數量級。


    2. 混入質粒時應輕柔操作。轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。

    3. 平板上陽性克隆密度過大時,由于營養不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應減少質粒用量。


    4. 利福平濃度不應高于25 μg/ml,過高的利福平濃度不利于農桿菌生長,會降低其生長速度和轉化效率。本公司感受態計算轉化效率時所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板含有20 μg/ml rif則轉化效率降低到1/2

    5. 培養基中加入利福平的目的是防止雜菌生長、篩選農桿菌;根據所用菌株抗性加入Ti質粒篩選抗生素可防止Ti質粒丟失,但Ti質粒篩選抗生素不利于農桿菌的轉基因操作,所以一般培養農桿菌時不考慮這些抗生素,Ti質粒丟失的概率極低(可以忽略)




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