<li id="4w4yg"></li>
<button id="4w4yg"><input id="4w4yg"></input></button>
<li id="4w4yg"></li>
  • <li id="4w4yg"><source id="4w4yg"></source></li>
  • <strike id="4w4yg"></strike>
    <strike id="4w4yg"><acronym id="4w4yg"></acronym></strike><button id="4w4yg"><dl id="4w4yg"></dl></button>
    <strike id="4w4yg"><acronym id="4w4yg"></acronym></strike>
    <bdo id="4w4yg"></bdo>
    產(chǎn)品展示 / products 您的位置:網(wǎng)站首頁 > 產(chǎn)品展示 > 感受態(tài)細(xì)胞 > 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞 > EHA105(pSoup)感受態(tài)細(xì)胞
    EHA105(pSoup)感受態(tài)細(xì)胞

    EHA105(pSoup)感受態(tài)細(xì)胞

    簡要描述:EHA105(pSoup)感受態(tài)細(xì)胞
    EHA105菌株由EHA101菌株改造而來,為C58型背景,核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因rif,pSoup即為EHA105 (pSoup)菌株,可幫助pGreen,62SK,pGs2系列質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制,同時(shí)賦予該菌株四環(huán)素(tet)抗性,適用于水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作。

    更新時(shí)間:2022-01-21

    廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

    瀏覽次數(shù):1143

    詳情介紹
    品牌其他品牌貨號(hào)BFNC86099
    規(guī)格10x100ul/50x100ul/100x100ul供貨周期現(xiàn)貨
    主要用途僅用于科研應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

    EHA105(pSoup)感受態(tài)細(xì)胞



    產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86099-01(10×100ul)/BFNC86099-02(50×100ul) /BFNC86099-03(100×100ul)

    EHA105(pSoup):                                                     100μl/支
    pGs2(control vector,10ng/μl )                                    10μl
    保存條件(保質(zhì)期):                                         -80℃(12個(gè)月)



    基因型

    C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine (pSoup-tetR)






    產(chǎn)品說明


    EHA105菌株由EHA101菌株改造而來,為C58型背景,核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因rif,為了便于轉(zhuǎn)化操作,此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA),此質(zhì)粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。在EHA105菌株中轉(zhuǎn)入help質(zhì)粒:pSoup即為EHA105 (pSoup)菌株,可幫助pGreen,62SK,pGs2系列質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制,同時(shí)賦予該菌株四環(huán)素(tet)抗性,適用于水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作。

    青旗生物生產(chǎn)的EHA105(pSoup)化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pGs2(卡那霉素抗性)質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。




    操作方法

    1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰中。

    2. 每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA(轉(zhuǎn)化效率較高,*使用盡量做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量),用手bo打管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。

    3. 加入700 μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基,于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí)。

    4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天

    (當(dāng)平板只含有50 μg/ml kan 時(shí),28℃培養(yǎng)48 h即可;平板中同時(shí)加入50 μg/ml kan20 μg/ml rif 時(shí),需28℃培養(yǎng)60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90 h)。





    注意事項(xiàng)

    1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染,轉(zhuǎn)化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。

    2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量,本公司生產(chǎn)的EHA105(pSoup)化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞具有四環(huán)素抗性,但在轉(zhuǎn)入目標(biāo)質(zhì)粒涂板篩選陽性克隆時(shí),只需加入目標(biāo)質(zhì)粒抗性的抗生素,不加四環(huán)素。

    3. 平板上陽性克隆密度過大時(shí),由于營養(yǎng)不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應(yīng)減少質(zhì)粒用量。

    4. 利福平濃度不應(yīng)高于25 μg/ml,過高的利福平濃度不利于農(nóng)桿菌生長,會(huì)降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。

    5. 培養(yǎng)基中加入利福平的目的是防止雜菌生長、篩選農(nóng)桿菌;根據(jù)所用菌株抗性加入鏈霉素或慶大霉素可防止Ti質(zhì)粒丟失,但鏈霉素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作,培養(yǎng)農(nóng)桿菌時(shí)不考慮鏈霉素或慶大霉素,Ti質(zhì)粒丟失的概率極低 (可以忽略)。



    EHA105(pSoup)感受態(tài)細(xì)胞



    備注


    1、農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方:

    抗生素

    配方

    原液

    工作液

    羧芐青霉素(carb

    雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

    50 mg/ml

    50 μg/ml

    硫酸卡那霉素(kan

    雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

    50 mg/ml

    50 μg/ml

    鏈霉素(strep

    雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

    10 mg/ml

    50 μg/ml

    利福平(rif

    DMSO溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

    10 mg/ml

    20 μg/ml

    慶大霉素(gent

    雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

    20 mg/ml

    40 μg/ml


    2、常用農(nóng)桿菌抗性:(R:抗;S:敏感。)

    農(nóng)桿菌菌株

    羧芐青霉素(carb)

    鏈霉素(strep)

    利福平(rif)

    慶大霉素(gent)

    硫酸卡那霉素(kan)

    AGL-1

    R

    S

    R

    S

    S

    EHA101

    S

    S

    R

    S

    R

    EHA105

    S

    S

    R

    S

    S

    LBA4404

    S

    R

    R

    S

    S

    GV3101

    S

    S

    R

    R

    S


    3LBYEB配方:

    component

    LB(液體)/L

    LB(固體)/L

    component

    YEB(液體)/L

    YEB(固體)/L

    Tryptone

    10 g

    10 g

    Tryptone

    5 g

    5 g

    Yeast extract

    5 g

    5 g

    Yeast extract

    1 g

    1 g

    NaCl

    10 g

    10 g

    牛肉浸膏

    5 g

    5 g

    NaOH

    調(diào)PH7.0

    調(diào)PH7.0

    蔗糖

    5 g

    5 g

    Agar

    15 g

    MgSO4*7H2O

    0.49 g

    0.49 g




    NaOH

    調(diào)PH7.0

    調(diào)PH7.0




    Agar

    15 g




    留言框

    • 產(chǎn)品:

    • 您的單位:

    • 您的姓名:

    • 聯(lián)系電話:

    • 常用郵箱:

    • 省份:

    • 詳細(xì)地址:

    • 補(bǔ)充說明:

    • 驗(yàn)證碼:

      請(qǐng)輸入計(jì)算結(jié)果(填寫阿拉伯?dāng)?shù)字),如:三加四=7

    聯(lián)


    国产成人无码久久久精品一| 高清无码午夜福利在线观看| 日韩国产中文字幕| 无码专区久久综合久中文字幕| 天堂无码在线观看| 中文成人无码精品久久久不卡| 欧洲人妻丰满av无码久久不卡| 亚洲乳大丰满中文字幕| 熟妇人妻系列aⅴ无码专区友真希| MM1313亚洲精品无码| 无码毛片AAA在线| 手机在线观看?v无码片| 亚洲va无码专区国产乱码| 亚洲精品中文字幕无码蜜桃| 亚洲AV无码成人网站久久精品大 | 国产中文字幕在线| 久久水蜜桃亚洲av无码精品麻豆 | 无码精品A∨在线观看免费| 日韩精品无码永久免费网站| 国产成人无码一区二区在线观看| 欧美日韩国产中文高清视频| 亚洲va无码va在线va天堂| 久久精品?ⅴ无码中文字幕 | 亚洲欧美中文字幕高清在线| 少妇人妻无码精品视频| 日韩av无码中文无码电影| 无码AV动漫精品一区二区免费| 亚洲ⅴ国产v天堂a无码二区| 中文字幕一区二区三区永久| 天堂а√在线中文在线| 少妇无码太爽了不卡视频在线看 | 中文字幕久精品免费视频 | 国产精品亚洲αv天堂无码| 亚洲av无码片vr一区二区三区| 久久亚洲2019中文字幕| 性无码专区一色吊丝中文字幕| 无码国产午夜福利片在线观看| 久久亚洲精品无码VA大香大香| 中文字幕亚洲精品资源网| 欧美乱人伦中文字幕在线| 人妻少妇看A偷人无码精品视频 |