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    AGL1感受態(tài)細(xì)胞

    AGL1感受態(tài)細(xì)胞

    簡(jiǎn)要描述:AGL1感受態(tài)細(xì)胞
    AGL1菌株為C58, RecA型背景,核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因rif和羧芐青霉素抗性基因carb,AGL1菌株適用于水稻、擬南芥、楊樹(shù)等植物的轉(zhuǎn)基因操作。

    更新時(shí)間:2022-01-21

    廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

    瀏覽次數(shù):828

    詳情介紹
    品牌其他品牌貨號(hào)BFNC86100
    規(guī)格10x100ul/50x100ul/100x100ul供貨周期現(xiàn)貨
    主要用途僅用于科研應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

    AGL1感受態(tài)細(xì)胞


    產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86100-01(10×100ul)/BFNC86100-02(50×100ul) /BFNC86100-03(100×100ul)
    AGL1:                                                                       100μl/支
    pCAMBIA2301(control vector,10ng/μl )                    10μl
    保存條件(保質(zhì)期):                                         -80℃(12個(gè)月)


    基因型

    C58 RecA (rifR/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine





    產(chǎn)品說(shuō)明

    AGL1菌株為C58, RecA型背景,核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因rif和羧芐青霉素抗性基因carb,為了便于轉(zhuǎn)化操作,此菌株攜帶一無(wú)自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒 pTiBo542DT-DNA,此質(zhì)粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件, pTiBo542DT-DNA質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。AGL1菌株適用于水稻、擬南芥、楊樹(shù)等植物的轉(zhuǎn)基因操作。

    青旗生物生產(chǎn)的AGL1化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pCAMBIA2301質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。


    操作方法



    1. -80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰中。

    2.每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA(轉(zhuǎn)化效率較高,*使用前盡量做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量),用手bo打管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
    3. 加入700 μl無(wú)抗生素的LBYEB液體培養(yǎng)基,于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí)。

    4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LBYEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3

    (當(dāng)平板只含有50 μg/ml kan 時(shí),28培養(yǎng)48 h即可;平板中同時(shí)加入50 μg/ml kan20 μg/ml rif 時(shí),需28培養(yǎng)60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28培養(yǎng)72-90 h)。


    注意事項(xiàng)

    1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10 ;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染,轉(zhuǎn)化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。


    2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

    3. 平板上陽(yáng)性克隆密度過(guò)大時(shí),由于營(yíng)養(yǎng)不足,陽(yáng)性克隆生長(zhǎng)變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應(yīng)減少質(zhì)粒用量。

    4. 利福平濃度不應(yīng)高于25 μg/ml,過(guò)高的利福平濃度不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng),會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率。本公司感受態(tài)計(jì)算轉(zhuǎn)化效率時(shí)所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板含有20 μg/ml rif則轉(zhuǎn)化效率降低到1/2

    5. 培養(yǎng)基中加入利福平的目的是防止雜菌生長(zhǎng)、篩選農(nóng)桿菌;根據(jù)所用菌株抗性加入Ti質(zhì)粒篩選抗生素可防止Ti質(zhì)粒丟失,但Ti質(zhì)粒篩選抗生素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作,所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時(shí)不考慮這些抗生素,Ti質(zhì)粒丟失的概率極低 (可以忽略)


    AGL1感受態(tài)細(xì)胞


    備注

    1、農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方:

    抗生素

    配方

    原液

    工作液

    羧芐青霉素(carb

    雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌

    50 mg/ml

    50 μg/ml

    硫酸卡那霉素(kan

    雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌

    50 mg/ml

    50 μg/ml

    鏈霉素(strep

    雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌

    10 mg/ml

    50 μg/ml

    利福平(rif

    DMSO溶解,0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌

    10 mg/ml

    20 μg/ml

    慶大霉素(gent

    雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌

    20 mg/ml

    40 μg/ml


    2、常用農(nóng)桿菌抗性:(R:抗;S:敏感。)

    農(nóng)桿菌菌株

    羧芐青霉素(carb)

    鏈霉素(strep)

    利福平(rif)

    慶大霉素(gent)

    硫酸卡那霉素(kan)

    AGL-1

    R

    S

    R

    S

    S

    EHA101

    S

    S

    R

    S

    R

    EHA105

    S

    S

    R

    S

    S

    LBA4404

    S

    R

    R

    S

    S

    GV3101

    S

    S

    R

    R

    S


    3LBYEB配方:

    component

    LB(液體)/L

    LB(固體)/L

    component

    YEB(液體)/L

    YEB(固體)/L

    Tryptone

    10 g

    10 g

    Tryptone

    5 g

    5 g

    Yeast extract

    5 g

    5 g

    Yeast extract

    1 g

    1 g

    NaCl

    10 g

    10 g

    牛肉浸膏

    5 g

    5 g

    NaOH

    調(diào)PH7.0

    調(diào)PH7.0

    蔗糖

    5 g

    5 g

    Agar

    15 g

    MgSO4*7H2O

    0.49 g

    0.49 g




    NaOH

    調(diào)PH7.0

    調(diào)PH7.0




    Agar

    15 g





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