酶聯免疫吸附實驗

一、   酶聯免疫吸附實驗液體樣本：

1.    血清：PP管（不含熱原和內毒素）收集全血，室溫自然凝固20-30分鐘，或4℃過夜，分離出血清，（適當傾斜離心管以擴大液面的橫截面，使血清能更大程度分離出來）。4℃ 2000轉/分離心20-30分鐘，將血清和紅細胞迅速小心地分離，收集上清，立即進行測定。如暫不檢測可將收集的血清分裝保存于-20℃或-80℃，避免反復凍融，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。血清樣本應注意避免溶血和細菌污染。

2.    血漿：使用抗凝管或加入抗凝劑（EDTA、檸檬酸鈉或肝素）的PP管收集全血，混合10-20分鐘，4℃ 2000轉/分，離心20-30分鐘，收集上清，立即進行測定，如暫不檢測可將收集的血清分裝保存于-20℃或-80℃，避免反復凍融。樣本應避免溶血或高血脂。保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3.    尿液、胸腹水、腦脊液、母乳、唾液：用無菌管收集樣本，4℃ 2000轉/分，離心20-30分鐘。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

4.    細胞培養上清：

1)        胞外：無菌管收集，4℃ 2000轉/分，離心20-30分鐘，除去細胞碎片和雜質，收集上清液備用，樣本保存在-20℃或-80℃，避免反復凍融，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

2)        胞內：加入裂解液，或用pH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液，使細胞濃度達到100萬/ml左右，通過反復凍融（如果反復凍融，破碎效果不好，可采用超聲波破碎），使細胞膜破壞并釋放出細胞內成分，2000轉/分，離心20-30分鐘，收集上清。

二、酶聯免疫吸附實驗固體樣本：

1.    組織標本：標本采集后用液氮迅速冷凍保存備用。使用時切割標本，稱取1g左右組織，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。4℃ 2000轉/分，離心20分鐘，仔細收集上清。分裝一份待檢測，其余冷凍備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

2.    植物標本：取0.1g新鮮植物組織樣本，液氮中充分研磨；加入樣品體積9倍的提取液（pH7.2-7.4左右的PBS），4℃ 8000轉/分離心30分鐘，取上清并暫時保存于4℃待用。如需精確提取，可在液氮研磨后加入1ml的提取液（80%甲醇）, -20℃過夜后再4℃ 8000轉/分，離心1小時，取上清；上清液過C-18固相萃取柱，過柱后的樣本真空干燥或氮氣吹干，保存備用；上樣前加入pH7.2-7.4左右的PBS緩沖液（1ml定容）。混勻后室溫放置30分鐘，4℃8000轉/分，離心15分鐘，取上清并暫時保存于4℃待用。

3.    土壤：稱取1g土壤，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，充分混勻。4℃ 2000轉/分，離心20分鐘，仔細收集上清。分裝一份待檢測，其余冷凍備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。