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    Rosetta 2(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

    Rosetta 2(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

    簡要描述:Rosetta 2(DE3)感受態(tài)細(xì)胞
    pRARE2質(zhì)粒可補充大腸桿菌缺乏的7種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)對應(yīng)的tRNA,提高外源基因的表達(dá)水平。

    更新時間:2022-01-20

    廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

    瀏覽次數(shù):906

    詳情介紹
    品牌其他品牌貨號BFNC86077
    規(guī)格10x100ul/50x100ul供貨周期現(xiàn)貨
    主要用途僅用于科研應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

    Rosetta 2(DE3)感受態(tài)細(xì)胞



    產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86077-01(10×100ul)/BFNC86077-02(50×100ul)


    Rosetta 2(DE3):                                               100μl/支

    pUC19 (control vector,10pg/μl):                           10μl

    保存條件(保質(zhì)期):                                   -80℃(6個月)



    基因型


    F- ompT hsdSB(rB- mB-) gal dcm (DE3) pRARE2 (CamR)





    產(chǎn)品說明

    Rosetta 2(DE3)菌株來源于BL21,是BL21的衍生菌株,為Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株,這兩種酶的缺失有效防止異源蛋白在大腸桿菌體內(nèi)的降解。將具有氯霉素抗性的pRARE2質(zhì)粒導(dǎo)入BL21 (DE3)細(xì)胞中即是Rosetta 2(DE3),pRARE2質(zhì)粒可補充大腸桿菌缺乏的7種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)對應(yīng)的tRNA,提高外源基因的表達(dá)水平。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū) (DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶),可同時表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。

    青旗生物生產(chǎn)的Rosetta 2(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)108 cfu/μg DNA。


    操作方法

    1. Rosetta 2(DE3)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的質(zhì)粒并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

    2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

    3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的LB無菌培養(yǎng)液,37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

    4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。

    5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。




    Rosetta 2(DE3)感受態(tài)細(xì)胞



    IPTG配制:

        Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

        by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.





    氯霉素配制

    Chloramphenicol  34 mg/ml in ethanol. Store at -20℃. Use at 34 µg/ml.






    注意事項

    1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

    2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

    3. 誘導(dǎo)時,IPTG濃度可選(0.1-10 mM均可)。

    4. 為獲得需要量的蛋白,誘導(dǎo)時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。

    5. Rosetta 2(DE3) 菌株攜帶 pRARE2質(zhì)粒,除復(fù)蘇培養(yǎng)基為無抗生素外,其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應(yīng)含有34 µg/ml氯霉素,以防質(zhì)粒丟失。





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