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    Tuner(DE3)pLysS感受態細胞

    Tuner(DE3)pLysS感受態細胞

    簡要描述:Tuner(DE3)pLysS感受態細胞
    Tuner(DE3)菌株是BL21菌株的lacZY基因 (半乳糖苷透性酶基因)突變株,此突變導致IPTG以均一速度進入體系中大腸桿菌的每個細胞,產生更加嚴格、均一的濃度依賴。

    更新時間:2022-01-20

    廠商性質:生產廠家

    瀏覽次數:869

    詳情介紹
    品牌其他品牌貨號BFNC86084
    規格10x100ul/50x100ul供貨周期現貨
    主要用途僅用于科研應用領域醫療衛生,生物產業

    Tuner(DE3)pLysS感受態細胞



    產品規格CAT#: BFNC86084-01(10×100ul)/BFNC86084-02(50×100ul)


    Tuner(DE3)pLysS:                                     100μl/支

    pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

    保存條件(保質期):                             -80℃(6個月)


    基因型

    F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm lacY1 (DE3)pLysS CamR


    產品說明


    Tuner(DE3)菌株是BL21菌株的lacZY基因 (半乳糖苷透性酶基因)突變株,此突變導致IPTG以均一速度進入體系中大腸桿菌的每個細胞,產生更加嚴格、均一的濃度依賴。將具有氯霉素抗性的pLysS質粒導入Tuner(DE3)細胞中即是Tuner(DE3) pLysS,pLysS表達T7溶菌酶,T7溶菌酶可以與T7 RNA聚合酶結合抑制其轉錄活性,進而降低目的基因的背景表達水平,但不干擾IPTG誘導的表達,非常適合毒性蛋白的原核表達。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區 (DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶),可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等質粒的蛋白表達。

    青旗生物生產的Tuner(DE3)pLysS感受態細胞由特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率達107 cfu/μg DNA。



    操作方法

    1. Tuner(DE3) pLysS感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的質粒并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

    2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

    3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的LB無菌培養液,37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

    4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養基上。

    5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。


    Tuner(DE3)pLysS感受態細胞


    IPTG配制:


    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

    氯霉素配制

    Chloramphenicol  34 mg/ml in ethanol. Store at -20℃. Use at 34 µg/ml.



    注意事項

    1. 感受態細胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

    2. 轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。

    3. 誘導時,IPTG濃度可選(0.1-10 mM均可)。

    4. 為獲得需要量的蛋白,誘導時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優化。

    5. Tuner(DE3) pLysS 菌株攜帶 pLysS質粒,除復蘇培養基為無抗生素外,其余所用培養基、培養液均應含有34 µg/ml氯霉素,以防質粒丟失。




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