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    ER2566感受態(tài)細胞

    ER2566感受態(tài)細胞

    簡要描述:ER2566感受態(tài)細胞
    ER2566菌株是NEB公司開發(fā)的具有超高轉(zhuǎn)化效率的蛋白表達原核菌株,來源于BL21。Lac啟動子啟動下游T7RNA聚合酶的表達,可用于T7啟動子表達載體(如pET系列)的高水平蛋白表達。fhuA2賦予ER2566菌株對噬菌體T1的抗性。同時ER2566為lon 和 ompT蛋白酶缺陷菌株。

    更新時間:2022-01-20

    廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

    瀏覽次數(shù):1037

    詳情介紹
    品牌其他品牌貨號BFNC86085
    規(guī)格10x100ul/50x100ul供貨周期現(xiàn)貨
    主要用途僅用于科研應用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

    ER2566感受態(tài)細胞



    產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86085-01(10×100ul)/BFNC86085-02(50×100ul)


    ER2566:                                                    100μl/支

    pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

    保存條件(保質(zhì)期):                             -80℃(6個月)




    基因型

    F- λ- fhuA2 [lon] ompT lacZ::T7 gene1 gal sulA11 Δ(mcrC-mrr)114::IS10 R(mcr-73::miniTn10-TetS)2 R(zgb-210::Tn10)(TetS) endA1 [dcm]


    產(chǎn)品說明

    ER2566菌株是NEB公司開發(fā)的具有超高轉(zhuǎn)化效率的蛋白表達原核菌株,來源于BL21。Lac啟動子啟動下游T7RNA聚合酶的表達,可用于T7啟動子表達載體(如pET系列)的高水平蛋白表達。fhuA2賦予ER2566菌株對噬菌體T1的抗性。同時ER2566為lonompT蛋白酶缺陷菌株。Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺失能夠有效抑制表達的異源蛋白在大腸桿菌體內(nèi)的降解,Δ(mcrC-mrr)114,mcr-73突變的存在使ER2566菌株無法對外源DNA進行標記、限制,提高了外源甲基化DNA的轉(zhuǎn)化效率。

    青旗生物的ER2566感受態(tài)細胞由特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達109 cfu/μg DNA。


    操作方法

    1.ER2566感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)粒或連接產(chǎn)物)并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

    2. 42水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

    3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YTLB),混勻后37200rpm復蘇60分鐘。

    4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YTLB培養(yǎng)基上。

    5. 將平板倒置放于37培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。



    ER2566感受態(tài)細胞


    IPTG

    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.  


    注意事項

    1. 感受態(tài)細胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

    2. 混入質(zhì)粒時應輕柔操作。

    3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應減少終用于涂板的菌量。

    4. 誘導時,IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

    5. 為獲得需要量的蛋白,誘導時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。




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