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    JM109(DE3)感受態細胞

    JM109(DE3)感受態細胞

    簡要描述:JM109(DE3)感受態細胞
    JM109(DE3)菌株來源于JM109,用于高效表達克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體(如pET系列)的基因。λ噬菌體DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶,該區整合于JM109的染色體上,所以稱為JM109(DE3)。可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,用于pET系列,pGEX,pMAL等質粒的蛋白表達。

    更新時間:2022-01-20

    廠商性質:生產廠家

    瀏覽次數:1197

    詳情介紹
    品牌其他品牌貨號BFNC86086
    規格10x100ul/50x100ul供貨周期現貨
    主要用途僅用于科研應用領域醫療衛生,生物產業

    JM109(DE3)感受態細胞



    產品規格CAT#: BFNC86086-01(10×100ul)/BFNC86086-02(50×100ul)


    JM109(DE3):                                             100μl/支

    pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

    保存條件(保質期):                             -80℃(6個月)



    基因型

    endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F? traD36 proAB laqI qM15](DE3)



    產品說明

    JM109(DE3)菌株來源于JM109,用于高效表達克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體(如pET系列)的基因。λ噬菌體DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶,該區整合于JM109的染色體上,所以稱為JM109(DE3)。可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,用于pET系列,pGEX,pMAL等質粒的蛋白表達。JM109(DE3)菌株不可用于藍白斑篩選試驗。

    青旗生物生產的JM109(DE3)感受態細胞由特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率高于108 cfu /μg DNA。



    操作方法

    1. JM109(DE3) 感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA并用手bo打EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。

    2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

    3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

    4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或

       LB培養基上。

    5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。



    JM109(DE3)感受態細胞



    IPTG配制:

    1 M(mol/L)IPTG(分 子 式: C9H18O5S,分 子 量: 238.30)溶液:稱取 2.38 g  IPTG固體,加入8ml ddH2O溶解

    補足水到10 ml用0.22um 濾膜過濾除菌,分裝即可。


    注意事項

    1. 感受態細胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

    2. 轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。

    3. 誘導時,IPTG濃度可選(0.1-2 mM均可)。

    4. 為獲得需要量的蛋白,誘導時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優化。




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